奧林巴斯熒光顯微鏡的持點
奧林巴斯熒光顯微鏡是普通顯微術的重大發展。它具有*的*性。熒光顯微術是在黑閱內背景下觀察標‘杠的形色圖象,有良好的反劉,故觀察清楚、方便,易哥:鑒別,眼睛也不員疲勞。由于熒光染色素的濃度極稀(儀1:Iooo00)便能發出明亮的熒光,因此一般油機體眾說是無動的,為活體觀察,如研究功能器官的過程和細微糾構,某些代謝過程的變化等,提供了廣泛的可能性。另外,英光色素染色法比較簡軋時間路標木制作客只,特別適于快速工億如傳染病的快速診斷等。
(1)奧林巴斯熒光顯微鏡可用明視場改暗視場方洗但”—般用睹權場效果較好,因為它產生的現場背景是黑的,圖象反襯強,;十;?立沒有明視場方便。至于透射熒光還是反射熒光,一般來說,反射熒光應用范圍廣一以它不僅適用觀察普通標刺;,而且還能現察不適明標本。
奧林巴斯熒光顯微鏡根據激發光波長的特點,熒光顯微術可用紫外光或紫藍光激發。蒙外光的特點在1:i4觀察機體組織的自體熒光<如核酸及金剛石等)在組織華工d:中便于區別背景熒光和染色目標的熒光。但陜點是:常常會引起標4;熒光的光致淬滅,標本難以重復觀察,并且沙顯微攝影發生團難。另外對活體標本有叨顯的殺傷作用,對長期從事這項工作人員的暇睛也有傷害。特別是對絕大多數的熒光色素來說,紫外區不是zui大的光譜吸收風因而不能得到先分的激發。而紫藍光卻沒有以上—些缺點,但不足的是不能激發組織的自體熒光,因此不適于研究組織的白體熒光結構。對于個別焚光色素,知羅達明R200,可用波長更長的藍綠光作為激發光為依。
(2)奧林巴斯熒光顯微鏡所觀察的熒光圖象,主要以兩個指標判斷結果,一是形態學特征,二是熒光的亮度。在免疫焚光工作巾,尤其是這樣,必須將兩者結合起來綜合判斷不可偏皮。糾果記錄是根據主觀指標或客觀指標,但一般常是憑工作者日力觀察的主觀指標由于這是定性的觀察,所以記錄的度較差。隨著科學校木的發展,采用客觀指標記錄結果巳開始應用。
1、用不同序度的中性濾片‘插入激發濾片和標本之間的光路中,以看焚光減駒的極度;
2、不同標本以相同的隕光時間進行顯檄攝影,然后用光密度計測定膠卷圖象;
3、直接用熒光計測熒光色素和兔疫熒光染色的鏡下標本,
4、用光敏電池漏光表Z;愧網象的亮度,或者與掃描裝置結備對視場的特定部位進行掃描等,如熒光顯微光度計。
奧林巴斯熒光顯微鏡對于觀察透明度差的標本,以及各種活體組織時,需采用反射光熒光裝置。其反射光熒光裝置的特點是:從光源來的混合光射到干涉分光濾鏡后,波長短的部分(榮外和紫藍)由于濾鏡上鍍膜的性質而反射,當濾鏡對向光源呈45。傾斜時,則垂直射向物鏡,’經物鏡射向標久使標本受到激發,這時物鎮直接起看聚光器的作用,同時波長氏的部分(綠、黃、紅等)能透過濾鏡比因此不向物鏡方向反射,濾鏡起到了激發濾板的作用,由于標本的熒光是處在可見光長波區;故對濾鏡也是可以透過的,因此能透射到目鏡以供觀察。根拇所需要激發光不同,干涉分光濫鏡可以更換。
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