徠卡熒光顯微鏡的性能特點
徠卡顯微鏡是任何顯微術的基本工具,它的主要作用是使被檢標本圖象得到不同程度的放大。在徠卡熒光顯微術中,徠卡熒光光源裝置是提供一定波長的激發光使被檢標本受激發射熒光,再通過徠卡顯微鏡的物鏡,目鏡系統使熒光圖象放大以供觀察,因此,一般來說,任何顯微鏡都可以用于熒光顯微術。不過,由于徠卡熒光顯微鏡所放大的象是熒光圖象,必須根據熒光產生和表現的特點,因此在使用方法上略有講究。
一般顯微鏡的光學元件,大都采用普通光學玻璃制造。它們對3000A以上的長波紫外線和可見光能很好地透過,因此完滿足一般徠卡熒光顯微術的要求,只是在個別情況下,當標本必須用短波紫外線激發時,才需用石英玻璃或特種玻璃的聚光鏡和反射鏡,這時載玻片也必須是特制的,但在透射光顯微術時,物鏡和目鏡只需用普通光學玻璃即可。如在反射光顯微術時,則物鏡必須能透過紫外光的。現就徠卡熒光顯微術的特點,介紹一下徠卡熒光顯微境的性能特點。
(1)徠卡反光鏡其反光層以鍍鋁為好,因為鋁對紫外光和可見光的紫藍區吸收少,反射率達90%以上,而鍍銀的反射率只達70%,另外應采用外反射,以避免光線來回經過玻璃而引起損失。同時要使用平面反光鏡而不使用凹面反光鏡,這樣使光源射來的光線基本平行。
(2)徠卡聚光器有三種;明場聚光器、暗場聚光器和相襯熒光聚光器。
①明場聚光器假如標本可用較長的光波來激發成熒光,則可用徠卡阿貝聚光鏡,而微弱的熒光或須用短波紫外光作光源的話,則必須用石英玻璃和熒石玻璃等材料制作的聚光鏡,否則,紫外光將會全部被普通玻璃所吸收。另外,由于徠卡油浸鏡頭的香柏油會自發熒光,會擾亂觀察,所以不宜使用,必須使用不發熒光的化學純甘油或檀香油等。
②徠卡暗場聚光器由于使用暗場聚光器時,激發光不直接進入物鏡,而不致直接射入眼中,這樣激發濾片可以大大減薄,從而顯著地增大了激發光的強度,抑制濾片也可以很薄,甚至可以不用。
由于徠卡暗場熒光顯微術時,它的背景是黑的,固增強了熒光圖象的亮度和反襯度,這樣,不僅提高了圖象的質量、觀察舒適,而且還能觀察出明場觀察時分辨不出來的細微顆粒,因此具有超顯微術的意義。
(3)徠卡相稱熒光聚光鏡它與普通聚光器相同,只是它的透鏡能透過紫外光,如與相襯物鏡配合使用,則可作相襯顯微術,也可作熒光顯微術,在同時有兩個光源(一個是汞燈作為熒光激發光,一個是白熾燈作為相襯照明)或者是一個光源通過適當安排分成兩條光路。在這樣的情況下,則可同時進行相襯,熒光聯合觀察,既能看到熒光圖象,又能看到相襯圖形,在某些情況下,有助于目標的定位和結果的正確判斷。